角色名：印地安纳·琼斯 演员：哈里森·福特

大学里广受欢迎的教授，机智勇敢，身手不凡，富有正义感。爱上了女间谍艾莎却被欺骗。和父亲一起保护圣杯不被纳粹抢走。

角色名：亨利·琼斯 演员：肖恩·康纳利

博物馆的老馆员，印第安纳琼斯的爸爸，热衷于研究圣杯。把研究成果都记在了日记本上。记性有些差，过去有些忽略儿子，不过内心还是真的爱儿子的。

角色名：艾莎薛尼德博士 演员：艾丽森.杜迪

美丽的女间谍，受纳粹指示来色诱印第安那琼斯，心狠手辣，最终因为贪婪而惨死。

角色名：华特陶诺文 演员：朱利安·格洛弗

反派角色，博物馆收藏家，为了得到圣杯投靠纳粹，出卖自己的祖国，坏事做尽。

角色名：马克思布诺迪 演员：丹霍姆·艾略特

琼斯在大学的同事，亨利琼斯的好友。本集跟随琼斯从美国来到欧洲，寻找圣杯的下落。

角色名：少年琼斯 演员：瑞弗·菲尼克斯

1912年十三岁时期的印地安纳·琼斯，当时是一名童子军，经历了一次夺宝历程。

角色名：萨拉 演员：约翰·里斯-戴维斯

琼斯博士的帮手，来自埃及的考古爱好者，协助琼斯找寻圣杯的下落，性格开朗，擅长挖掘，被称作“埃及最好的挖掘机”。

角色名：阿道夫希特勒 演员：迈克尔·谢尔德

希特勒在圣战奇兵中有短暂的出场，并在琼斯博士的圣杯日记上签下大名。